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大鼠白細胞介素4elisa試劑盒操作步驟
更新時間:2016-05-11   點擊次數(shù):1380次

大鼠白細胞介素4elisa試劑盒進口原裝96t包裝試劑盒。
ELISA檢測試劑盒應用定性夾心免疫檢測技術,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,這些多肽是中國型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強的肽段,分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標準品加入孔中并孵育,如果其中存在HEVIgM抗體,這些抗體就會與HEV的多肽抗原結合,并固定在上面,洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgMHRP(辣根過氧化物酶)酶結合物,經第二次孵育后,酶結合物就會與次孵育結合上的HEVIgM抗體相結合,洗板除去未結合的酶結合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育時會發(fā)生酶底物反應,只有那些含有HEVIgM抗體和酶結合物所形成的復合物的孔才會發(fā)生顏色變化,加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應,并在波長:450nm處測量O.D.值,按照本HEVIgM抗體elisa試劑盒的測試標準,O.D.值大于或等于CutOff值的樣品被認為是初試陽性。
大鼠白細胞介素4elisa試劑盒操作步驟:
用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法
1.包被:用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質含量為1~10μg/ml。在每個聚苯乙烯板的反應孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。
2.加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。

3.加酶標抗體:于各反應孔中,加入新鮮稀釋的酶標抗體(經滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。
4.加底物液顯色:于各反應孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
5.終止反應:于各反應孔中加入2M硫酸0.05ml。
6.結果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結果:反應孔內顏色越深,陽性程度越強,陰性反應為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“”號表示。也可測OD值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調零后測各孔OD值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。

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